Головна » Імунологія » Трансляція мРНК. Особливості трансляції мРНК при синтезі антитіл


Біологічна активність виділених препаратів мРНК оцінюється за їх здатності синтезувати в безклітинних системах відповідні поліпептидні ланцюги. Визначаючи величину синтезу специфічних пептидів по відношенню до всіх знову синтезованим, можна визначити також чистоту препарату мРНК. Необхідною умовою при цьому є використання для мічення білка не який-небудь однієї амінокислоти, але суміші щонайменше з 10 радіоактивних амінокислот і аналіз продуктів синтезу методами з високою роздільною здатністю (наприклад, двовимірне картування пептидів).

Для трансляції мРНК використовують безклітинні системи трьох типів: з асцитної гепатоми Кребса (Swan е. а., 1972; Schechter, 1973). ретикулоцитів кролика (Stavnezer, Huang, 1971; Mach ea, 1973; Cowan е. а., 1976) і проростків пшениці (Schechter, Burstein, 1976; Storb, Marvin, 1976). Найбільш зручною, мабуть, є остання система. Вихід міченого попередника в ній становить 01 пмоль, або 26 нг на 0007 А2во одиниць внесеної мРНК (Schechter, Burstein, 1976).

Оскільки на даному етапі завданням описуваних досліджень є вивчення потенційної трансляційної здібності мРНК, а рослинні і тваринні безклітинні системи в принципі ведуть себе в цьому відношенні однаково (Schechter, Burstein, 1976), то ступінь придатності та переваг тієї чи іншої системи, очевидно, визначається наступними трьома параметрами: величиною ендогенного білкового синтезу (чим нижче, тим краще), доступністю і простотою необхідних інгредієнтів і кількістю мРНК, яку треба внести в систему для отримання достовірного синтезу досліджуваного білка.

Аналогом безклітинній системи іноді служать також ооцити жаби. Було показано (Smith е. а., 1973), що введення в ооцити мРНК, що кодує ланцюга імуноглобулінів., Призводить до синтезу цих ланцюгів. Цей метод, однак, більш складний і вимагає значних кількостей мРНК.

Більшість дослідів по трансляції проведено з мРНК, які кодують синтез L-ланцюгів (L-мРНК), так як їх виділення значно простіше, ніж виділення мРНК, що кодують синтез Н-ланцюгів (Н-мРНК). Вивчення продуктів трансляції мРНК, що кодують L-цепи мієломних імуноглобулінів, привело до несподіваного результату. Виявилося, що в безклітинних системах мРНК кодують синтез поліпептидів (попередників), великих за розмірами, ніж зрілі L-ланцюга. Вперше освіту більш важкого продукту під дією 13S мРНК із клітин плазмоцитома МОРС 41 описали Сван і співавтори (Swan е. а., 1972), під дією 10-14S мРНК із клітин плазмоцитома МОРС 21 - Мільштейн і співавтори (Milstein е. а., 1972). Молекулярний вага утворюється продукту був більше молекулярного ваги відповідних L-ланцюгів (на 1500), з чого було зроблено висновок про наявність в ньому 15 додаткових амінокислотних залишків.

Оскільки при додаванні до безклітинній системі 355-формилметионин-тРНК в якості єдиного джерела мітки 355-метіоніл виявлявся у важкому компоненті, було зроблено висновок, що принаймні частина цих додаткових амінокислот розташована на NH2-коіце молекули L-ланцюга (у еукаріотів синтез поліпептидних ланцюгів починається з включення метіоніну). Надалі дані про синтез попередника були підтверджені в дослідах з мРНК »кодують синтез xL-ланцюгів МОРС 70е (Toncgawa, Baldi, 1973), МРС" (Storb, Marvin, 1976), МОРС 41 (Mach ea, 1973), МОРС 321 ( Schechter, Burstein, 1976), МОРС 63 (Schechter е. а., 1976) і L-ланцюгів МОРС 104Е (Burstein е. а., 1976).



...


1 (0,00308)