Головна » Імунологія » Властивості активних центрів антитіл. Реактивність імуноглобулінів


Метод спінової мітки дозволив також вловити різницю у властивостях кролячих антитіл до 246-трінітрофенілу (ТИФ) після первинної та вторинної імунізації. Ці антитіла досліджували за допомогою відмінних за просторовій структурі спін-мічених ТНФ-гаптенов як методом ЕПР, так і щодо зменшення квантового виходу флуоресценції антитіл.

Виявлено, що антитіла, Утворені в ході первинного і вторинного імунних відповідей, мають відмінності в будові активних центрів. Комплекси первинних антитіл з гаптенами є менш жорсткими і більш чутливими до дії органічних розчинників і до стеричним змін лігандів.

Піетт і співробітники (Piette е. а., 1972) досліджували комплекси негативно зарядженого спін-міченого бензоату і комплекси позитивно зарядженого спін-міченого тріметілфеніламмонія з відповідними кролячими антитілами. Судячи по спектрах ЕПР, комплекси антитіл з негативно зарядженими спін-міченими гаптенами є більш жорсткими, ніж комплекси антитіл з позитивно зарядженими спін-міченими гаптенами.
Крім того, було виявлено, що ступінь іммобілізації N-О-групи спін-міченого бензоату в активних центрах антитіл варіювала індивідуально у різних кроликів.

Хсіао і Піетт (Hsia, Piette, 1969) досліджували перехресну реактивність і структурну гетерогенність кролячих анти-ДНФ-антитіл. Вони порівнювали спектри ЕПР антитіл, виділених за допомогою гомологичного ДНФ - (анти-Д) і перехресного гаптена (анти-Т) після взаємодії зі спин-міченим ДНФ (ДНФ-СМ). Aмакс спектра ЕПР комплексу анти-Д-і ДНФ-СМ виявилося рівним 59 Гс, амакс спектра комплексу (анти-Т + ДНФ-СМ) - 62 Гс.

Амакс є функцією часу кореляції і полярності оточення N-О-групи (Гамільтон, Мак-Коннел, 1970). Тому відмінності в цих спектрах ЕПР можуть бути обумовлені або більшої іммобілізацією групи N-О в комплексі (анти-Д + ДНФ-ОМ), або більшої гідрофобністю її оточення. У будь-якому випадку вони вказують на структурні відмінності активних центрів анти-Д і анти-Т.

В іншій серії дослідів досліджували комплекси анти-Д з гомологічним ДНФ-СМ і перехресними спін-міченими гаптенами орто-і паранітрофеноламі: оНФ-СМ і nНФ-СМ. Амакс спектрів ЕПР перехресних спін-мічених гаптенов, АНХ-СМ і ЛНФ-СМ, розташованих в активних центрах, також виявилося більше, ніж у гомологичного ДНФ-СМ.

Автори пояснюють це тим, що гомологічних гаптен розташований в активному центрі таким чином, що N-О-група мітки безпосередньо не взаємодіє з амінокислотними залишками активного центру. З іншого боку, перехресний гаптен утворює менш жорсткий комплекс, при якому мітка має велику ступінь свободи, що дозволяє їй взаємодіяти з гідрофобними ділянками активного центру. Спектри ЕПР спін-мічених перехресних гаптенов відрізняються від гомологичного ще присутністю компонент, відповідних більш швидкому обертанню.

Це може бути наслідком існування рівноваги між двома орнентаціямі спін-мечепих гаптенов в активних центрах або неоднакового спорідненості у різних популяцій антитіл, специфічних до відповідного гаптеном.



...


1 (0,00477)